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HTRF助力高效GPCR靶向药物发现

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小时候上学,最渴望就是放寒假,最可怕的是竟然还有寒假作业!

 

 

长大之后,假期来了!!

开心开心!我要放飞自我~



 

可是我的寒假作业呢?.......

 


 

放假前,老板留下了一道思考题,我们新年项目方向:针对GPCR靶点做药物研发

 

 

小优小优,有你无忧!小优技术贴,带你入门GPCR靶点药物研究


什么是GPCR?

G蛋白偶联受体(GPCR)是一个庞大且功能多样的膜蛋白家族,参与到大多数的细胞和生理过程的调节,包括视觉、嗅觉、代谢、免疫反应、神经活动等等,并与肥胖、糖尿病、心血管疾病、炎症、肿瘤、老年痴呆症等严重影响人类健康的疾病有关,市场上40%的处方药其靶点是GPCR,因而是现代药物研发中应用最多的靶点。


 

HTRF技术----高通量药物筛选研发领军技术!

HTRF®(均相时间分辨荧光,Homogeneous Time-Resolved Fluorescence )是一种用来检测纯液相体系中待测物的技术。该技术基于荧光共振能量转移(FRET)和时间分辨荧光(TRF)两大技术,开通的高通量药物筛选利器。适用于药物早期发现和功能性检测,由于实验通量高、操作简单方便、数据真实可靠、高性价比,深受国内各大药企喜爱!


 

HTRF在GPCR研究中的应用优势:

1.操作简单,空板直接加样,加完即可检测,时间短!                                       2.适合珍贵样本:整个实验体系只需20ul

3.均相检测:无需包被,免洗ELISA,省时省力!                                              4.体系稳定:7天内可随时检测,信号基本不变

5.数据客观真实:比值处理可有效去除背景荧光,假阳性率和价阴性率低          6.高端检测,只需简单的酶标仪就可以轻松搞定!


应用举例一:HTRF在GPCR功能性研究应用

1.1.GPCR 第二信使cAMP检测

cAMP作为第二信使在信号转导方面发挥着至关重要的作用。


 

HTRF有三款检测cAMP试剂盒:

三种试剂盒均采用了HTRF ® 技术,竞争法检测原理,每种试剂盒都针对特定范围的cAMP浓度,从而确保了实验的灵敏度。所有试剂盒均可用于96孔、384孔或者1536孔的细胞水平的实验。


 

产品信息:

类别

产品名

规格

Gs

cAMP - Gs HiRange kit

1000tets
20000tests
1000000tets

cAMP - Gs Dynamic kit

Gi

cAMP - Gi kit


1.2. GPCR第二信使IP1检测——可替代钙流

Gq通路活性的检测有两种途径,分别测定细胞内Ca2+浓度的变化和IP3含量的变化,前者主要通过荧光法来实现。后者中的IP3半衰期很短,可通过测定IP1的含量,可以知道细胞内IP3的产量,从而研究Gq通路的活化过程。Cisbio基于HTRF ® 技术的IP1测量试剂盒是研究Gq通路的良好工具。目前该试剂盒被广泛应用于药物的高通量筛选。


 

产品信息如下:

类别

产品名

规格

IP-one

IP-One - Gq kit

1,000 test / 20000test/ 100000test


1.3 HTRF技术在磷酸化蛋白检测中的应用


 

实验时,将细胞处理完毕,然后裂解细胞,将裂解液转移到新的微孔板中,加入二种抗体混合,室温孵育2小时即可进行检测!

产品信息如下:

类别

规格

货号

ERK total kit

96test/500 tests/10000test

64NRKPET/G/H

ERK phospho-T202/Y204 kit

500 tests/10000test/50000test

64ERKPEG/H/Y

Advanced ERK phospho-T202 /Y204 kit

96test/500 tests/10000test

64AERPET/G/H

 

应用举例二:HTRF在 GPCR的配体受体结合及药物筛选应用 – Tag-lite技术

Tag-lite技术是SANP-Tag与HTRF技术结合,进行活细胞表面受体分析的一种技术。

首先构建SNAP与目标GPCR的共转染质粒,然后转染细胞,得到共表达SNAP和目标GPCR的细胞,使SNAP标记上能量供体Tb,生成标记Tb的GPCR细胞株,即口进行受体配体结合实验,当加入能量受体d2标记的配体是,受体和配体结合,Tb和d2接近,产生HTRF信号!如下图:

 

 

Tag-Lite®技术优势

● 无放射性

● 基于活细胞的GPCR受体配体结合分析的平台,构建的细胞可用于所有功能性检测

● 采用HTRF®技术,背景低、操作简单、 数据质量高

 

想要HTRF更多资料和产品技术介绍,可联系电话:13501872804;邮箱:chengzq@univ-bio.com

 

 

 

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